凯氏定氮法测定蛋白质含量

2021-08-25 来源:

凯氏定氮法是由荷兰科学家凯道尔于1833年创建的，已经发展趋势为变量定义、少量、平少量凯氏定氮法及其全自动定氮仪法等，是剖析有机化学化合物中氮量的常见方式。凯氏定氮法的理论基础是蛋白中的中氮量一般占其总品质的16%上下(12%~一19%),因而，根据测量物质中的中氮量便可估计出物质中的总蛋白质含量(假定测量物质中的氮全来源于蛋白)，即:蛋白质含量=中氮量/16%。

凯氏定氮法是测量化合物或化合物中高锰酸盐指数量的一种方式。即在有金属催化剂的标准下，用硫酸消化吸收试品将有机化学氮都转化成无机物氨盐，随后在偏碱标准下将氨盐转换为氨，随水蒸气蒸馏出去并为过多的硼酸溶液液消化吸收，再以标准盐酸滴定管，就可测算出试品中的氮量。因为蛋白中氮量较为稳定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此方法是經典的蛋白定量分析方式。

凯氏定氮法基本原理

蛋白是中氮的有机化学化合物。蛋白与硫酸和金属催化剂一同加温消化吸收，使蛋白质分解，溶解的氨与盐酸融合转化成硫酸铵。随后脱灰水蒸气蒸馏使氨分散，用硼酸溶液消化吸收后再以盐酸或盐酸标液滴定管，依据酸的使用量乘于计算指数，并计算成蛋白质含量。中氮量*6.25=蛋白质成分

1.有机化合物中的氨在强热和CuSO4，浓H2SO4功效下，硝化反应转化成（NH4)2SO4

凯氏定氮法

反应方程为：

2.在凯氏定氮器中与碱功效，根据水蒸气蒸馏释放出来NH3，搜集于H3BO3水溶液中

反应方程为:

3.用己知浓度值的H2SO4（或HCI）标液滴定管，依据HCI耗费的量计算出氮的成分，随后乘于相对的计算因素，即得蛋白的成分

反应方程为：

或

凯氏定氮法实验试剂

全部实验试剂均用没有氨的纯净水配置。